Автореферат и диссертация по медицине (14.03.02) на тему:Регенерация поврежденной кости нижней челюсти и структурно-клеточные изменения субмандибулярных лимфатических узлов крыс при использовании аутологичного фибринового сгустка

Ковынцев, Дмитрий Николаевич Новосибирск 2010 г.

Ученая степень

кандидат медицинских наук

ВАК РФ

14.03.02

Автореферат диссертации по медицине на тему Регенерация поврежденной кости нижней челюсти и структурно-клеточные изменения субмандибулярных лимфатических узлов крыс при использовании аутологичного фибринового сгустка

ли - 3

На правах рукописи

Ковынцев Дмитрий Николаевич

РЕГЕНЕРАЦИЯ ПОВРЕЖДЕННОЙ КОСТИ НИЖНЕЙ ЧЕЛЮСТИ И СТРУКТУРНО-КЛЕТОЧНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ СУБМАНДИБУЛЯРНЫХ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ КРЫС ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ АУТОЛОГИЧНОГО ФИБРИНОВОГО СГУСТКА

14.03.02 - патологическая анатомия 03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск - 2010

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте региональной патологии и патоморфологии СО РАМН (Новосибирск) и в Институте химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (Новосибирск)

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор Криницына Юлия Михайловна

доктор медицинских наук,

профессор Машак Светлана Владимировна

Ведущая организация:

Алтайский государственный медицинский университет Росздрава Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию (Барнаул)

Защита диссертации состоится «_»_2010 г.

в_час. на заседании диссертационного совета Д 001.037.01 в

Научно-исследовательском институте региональной патологии и патоморфологии СО РАМН по адресу: 630117, Новосибирск, ул. Тимакова, 2, тел. 334-84-38.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Научно-исследовательского института региональной патологии и патоморфологии СО РАМН.

Автореферат диссертации разослан «_»_2010 г.

Майбородин Игорь Валентинович Власова Лариса Федоровна

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 001.037.01

доктор биологических наук Молодых Ольга Павловна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Повреждение тканей часто приводит к нарушению целостности стенок кровеносных сосудов, что вызывает активацию тромбоцитов после контакта с коллагеном. Тромбоциты инициируют образование тромба через активацию коагуляционной системы. После образования тромбина фибриноген трансформируется в фибрин, что рассматривается в качестве первого этапа заживления раны. Показано, что препараты фибрина воспроизводят данный процесс и облегчают процессы репарации (Jackson M.R., 2001; Mankad P.S., Codispoti М., 2001; Valbonesi ML, 2006; Laidmae I. et al., 2006). Продукты деградации фибрина вызывают, в частности, миграцию остеогенных клеток и гингивальных фибробластов in vitro в очаг поражения и более быструю регенерацию хирургических костных дефектов in vivo в эксперименте. Фибриновые клеи и пленки могут служить своеобразным субстратом для поддержки роста фибробластов и их функций. Адгезивные материалы, содержащие фибрин и фибронектин, их мономеры или продукты деградации, ускоряют заживление периодонтальных, в том числе и костных, тканей (Soffer Е. et al., 2003; Kaijzel E.L. et al., 2006; McDougall S. et al., 2006).

Богатая тромбоцитами плазма или богатый тромбоцитами фиб-риновый сгусток (БТФС) — это модификация фибринового клея, приготовленная из аутологичной крови. Такие препараты применяют для ускорения и улучшения качества регенерации кости при стоматологической имплантологии. Плазма или БТФС содержат множество цитокинов и ростовых факторов в высокой концентрации, эти релизы вызывают миграцию и деление всех мезенхималь-ных (включая хондроциты и мезенхимальные стволовые клетки) и эпителиальных клеток, стимулируют синтез коллагена и матрикса соединительной ткани (Schmidt М.В. et al., 2006; Schwartz-Arad D. et al., 2007; Sanchez M. et al., 2007).

Следует отметить, что наряду с положительной оценкой результатов применения препаратов фибрина, имеются данные о неэффективности подобных методик лечения в стоматологии (Lekovic V. et al., 2001; London R.M. et al., 2002; Froum S.J. et al., 2002; Fuerst G. et al., 2004). Противоречивые и взаимоисключающие данные об эффективности использования препаратов фибрина в стоматологии определяют актуальность дальнейших исследований в данной области медицины.

Существенное значение для разработки эффективных методов лечения с использованием препаратов фибрина имеет выяснение особенностей регенераторных реакций, развивающихся в очаге поражения в данных условиях. Однако в литературе недостаточно отражены результаты исследований активности воспалительного процесса в тканях кости нижней челюсти при лечении ее повреждений с использованием препаратов фибрина, в частности БТФС, приготовленного из аутологичной плазмы крови с тромбоцитами. Следует также отметить полное отсутствие сведений об изменениях регионарных лимфатических узлов после применения препаратов фибрина, тогда как именно лимфатические узлы являются маркерами выраженности воспалительного процесса в тканях и по их изменениям можно более точно оценивать эффективность проведения тех или иных лечебных мероприятий.

Цель исследования - изучить особенности регенерации поврежденного участка кости нижней челюсти и структурные изменения субмандибулярных лимфатических узлов при применении богатого тромбоцитами фибринового сгустка.

Задачи исследования:

1. Методами световой микроскопии изучить процессы заживления участка поврежденной кости нижней челюсти крыс в различные сроки при естественном ходе репарации и после применения БТФС.

2. Определить основные структурные и клеточные изменения регионарных к участку повреждения кости нижней челюсти субмандибулярных лимфатических узлов при самостоятельной регенерации и на фоне использования БТФС.

3. Установить положительные и отрицательные стороны влияния БТФС на процессы регенерации поврежденного участка кости нижней челюсти и реакции регионарных лимфатических узлов, оценить возможные осложнения применения препаратов фибрина.

Научная новизна. Впервые проведено сравнительное исследование процессов регенерации в участке повреждения кости нижней челюсти крыс при естественном заживлении и после применения БТФС. Показано, что при естественно протекающей регенерации очага повреждения кости нижней челюсти у крыс дефект заполняется кровью и формируется сгусток с большим количеством эритроцитов. Через 1 нед в дефекте кости среди фрагментов кровяного сгустка и грануляций уже присутствуют отдельные островки

молодой костной ткани, через 2 нед отверстие в кости нижней челюсти полностью замещается молодой костной тканью. После операции с последующим заполнением дефекта кости нижней челюсти БТФС не происходит образования кровяного сгустка. Через 1 нед весь дефект костной ткани заполнен слившимися островками вновь сформированной кости, а через 2 нед после использования БТФС происходит дальнейшее замещение дефекта костной тканью и формирование костной мозоли.

Впервые изучено состояние регионарных лимфатических узлов в различное время при регенерации поврежденной кости. Установлено, что в субмандибулярных лимфатических узлах при заживлении участка повреждения кости нижней челюсти расширяется корковое плато, увеличивается объем лимфоидных фолликулов и мозговых синусов при одновременном снижении относительной площади паракортикальной зоны. Во всех структурных элементах лимфатических узлов сначала возрастает число иммуно- и плазмо-бластов, делящихся клеток и клеточных элементов с признаками деструктивных изменений при параллельном уменьшении числа лимфоцитов. Затем численность указанных клеток нормализуется, но к концу наблюдения увеличивается содержание ретикулярных клеток и макрофагов.

Впервые показано, что различия в строении субмандибулярных лимфатических узлов крыс при естественным течении регенерации нижней челюсти и после применения БТФС заключаются в разных изменениях объемной плотности коркового плато и паракортекса. При спонтанном заживлении размеры указанных структур через 4 и 5 нед после операции достоверно отличаются от исходных, а после применения БТФС - находятся на уровне контроля. На фоне применения БТФС численные значения лимфоцитов, иммуно- и плазмобластов, ретикулярных клеток, макрофагов, фигур митозов и клеточных элементов с признаками деструктивных изменений в различных зонах лимфоидной паренхимы изменяются в меньшей степени и раньше возвращаются к контрольному уровню.

Впервые установлено, что использование фибрина приводит к более значительному возрастанию численности макрофагов в просвете мозговых синусов, что может быть связано с необходимостью лизиса БТФС этими клетками в участке повреждения кости нижней челюсти и последующей миграцией макрофагов с фибрином в регионарные лимфатические узлы.

Впервые установлено, что при использовании БТФС в цитог-рамме содержимого мозговых синусов регионарных лимфатических узлов возрастает содержание эозинофилов, что может являться косвенным признаком аллергизации организма.

Теоретическое и практическое значение работы. Получены новые знания об особенностях регенерации кости нижней челюсти после применения БТФС. Важное значение для практической деятельности имеет выявление значительно более интенсивного, чем при спонтанном заживлении, течения репарационных процессов: дефект раньше и быстрее заполняется островками костной ткани, которые раньше сливаются и формируют молодую костную ткань.

Полученные результаты свидетельствуют о целесообразности применения препаратов фибрина для ускорения репаративных процессов в тканях. Поскольку существует возможность развития аллергических реакций в ответ на присутствие БТФС в тканях, необходимо дальнейшее совершенствование данного метода: максимальное ограничение времени контакта БТФС с инородными веществами во время его подготовки, разработка способов контроля степени контрактации БТФС, определение степени его минимально необходимого объема и линейных размеров для эффективного применения, применение десенсибилизирующих лекарственных средств.

На защиту выносятся следующие основные положения:

1. Репаративные процессы при повреждении кости нижней челюсти и применении БТФС проходят значительно интенсивнее, чем при спонтанном заживлении, дефект раньше и быстрее заполняется островками костной ткани, которые раньше сливаются и формируют молодую костную ткань.

2. Особенности реакции субмандибулярных лимфатических узлов крыс после заполнения дефекта нижней челюсти БТФС заключаются в меньшей выраженности изменений количественных показателей разных отделов лимфоузлов и более раннем возвращении их к контрольному уровню.

3. Использование фибрина обусловливает более значительное увеличение численности макрофагов и эозинофилов в просвете мозговых синусов лимфатических узлов, что связано с необходимостью лизиса БТФС макрофагами в участке повреждения кости нижней челюсти и последующей миграцией этих клеток с фибрином в регионарные лимфатические узлы.

Апробация материалов диссертации: основные положения диссертации доложены на Международной гистологической конференции «Морфогенезы в эволюции, индивидуальном развитии и эксперименте» (Тюмень, 2008), Международной конференции «Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии» (Новосибирск, 2008), Международной научной конференции «Вопросы морфологии XXI века» (Санкт-Петербург, 2008), Всероссийском симпозиуме «Челюстно-лицевая хирургия и стоматология: Новые технологии в стоматологии» (Новосибирск, 2008) и межлабораторной научной конференции в Научно-исследовательском институте региональной патологии и патоморфологии СО РАМН (Новосибирск, 2010).

Внедрение результатов исследования в практику. Результаты исследований внедрены в научно-исследовательскую работу Центра новых медицинских технологий Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, лечебную практику ООО «Дентал-Сервис» и «Дента».

Структура и объем диссертации: Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 2 глав собственных результатов, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа изложена на 169 страницах компьютерного текста, содержит 9 таблиц, иллюстрирована 38 многокомпонентными комбинированными рисунками. Список литературы включает 313 источников (99 отечественных и 214 иностранных). Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Проведено сравнительное морфологическое исследование процессов заживления участка повреждения кости угла нижней челюсти и состояния субмандибулярных лимфатических узлов крыс-самцов породы Вистар в динамике естественного течения репаративного процесса и после заполнения искусственно созданного отверстия БТФС.

Модель дефекта костной ткани в эксперименте. Под общим ингаляционным эфирным наркозом, в условиях чистой операционной, при соблюдении правил асептики и антисептики, после обработки кожи спиртом скальпелем производили разрез кожи длиной 1,5 - 2 см по нижнему краю нижней челюсти. Тупым способом при помощи распатора отслаивали жевательную мышцу и обнажали поверхность кости нижней челюсти в области ее угла. Стоматологическим буром делали круглое отверстие диаметром 2 мм в кости угла нижней челюсти, с полостью рта дефект кости не сообщался. Затем послойно ушивали рану викрилом. Животных выводили из эксперимента передозировкой эфирного наркоза через 1, 2, 3, 4 и 5 нед после создания дефекта кости нижней челюсти.

Животные были разделены на 2 группы в зависимости от хода регенерации участка поврежденной кости нижней челюсти:

1 -я группа - естественное течение репаративного процесса - 65 крыс;

2-я группа - репарация на фоне заполнения искусственного дефекта нижней челюсти подходящим по размеру БТФС, приготовленным ex tempore из крови крыс данной линии (Колесников И.С., 2006; Майбородин И.В. и др., 2007,2008,2009; Рагимова Т.М., 2009) - 62 животных.

Методы морфологического анализа. Участок нижней челюсти с искусственно созданным дефектом и расположенные под краем нижней челюсти субмандибулярные лимфатические узлы фиксировали в 4% растворе параформальдегида на фосфатном буфере (pH 7,4) не менее 24 ч. Фрагменты нижней челюсти декальцинировали в растворе «Биодек R» (Bio Optica Milano, Италия) в течение 24 ч. Далее весь материал обезвоживали в градиенте этанола возрастающей концентрации, просветляли в ксилоле и заключали в парафин. Срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином и по Романовскому (Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996).

Определение структурной организации исследуемых тканей проводили при увеличении светового микроскопа до 1200 раз. Применяли квадратную тестовую систему, совмещаемую на экране компьютера с изображением, полученным при помощи цифровой видеокамеры микроскопа. Для изучения показателей структуры лимфатических узлов (использование объектива с увеличением х5) конечная площадь тестового квадрата была равна 10000 мкм2 (сторона квадрата 120 мкм), при подсчете цитограммы клеток (при-

менение объектива с увеличением х40) - 144 мкм2 (сторона квадрата 12 мкм) (Майбородин И.В. и др., 2007,2008,2009). Статистическую обработку результатов проводили на прикладной статистической программе MS Excel (Microsoft, USA), определяли среднее арифметическое и стандартное отклонение. Различия между средними считали достоверными при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Участок повреждения кости нижней челюсти и субмандибулярные лимфатические узлы при спонтанной регенерации

Регенерация участка повреждения кости нижней челюсти.

Через 1 нед после повреждения кости нижней челюсти крыс при спонтанной регенерации было найдено, что отверстие частично заполнено кровью, на некоторых участках в дефекте кости уже присутствовали фрагменты рыхлой волокнистой соединительной ткани и грануляции. Следует отметить начало образования кости в дефекте (формирование отдельных островков молодой кости и хряща среди грануляций).

Через 2 нед отверстие было полностью закрыто молодой костной тканью с большим числом полнокровных кровеносных сосудов по краю дефекта. Среди вновь образованных костных структур также присутствовала хрящевая ткань, особенно в центре искусственного отверстия.

На 3-й неделе отверстие было полностью закрыто вновь образованной костной тканью. О месте операции можно было судить по оставшимся крупным сосудам и хаотично расположенным костным балкам (костная мозоль). К этому моменту появились полностью сформированные полости с костным мозгом. Через 4 и 5 нед в большинстве случаев естественного заживления место операции можно было найти только по следам костной мозоли.

Изменения структуры лимфатических узлов. При спонтанной регенерации через 1, 2, 3, 4 и 5 нед объемная плотность коркового плато превосходила исходный уровень соответственно на 82,4; 82,4; 35,3; 25 и 29,4%. Спустя 1 и 2 нед объемная плотность лимфоидных фолликулов без центров размножения на срезе органа превосходила исходный уровень на 51,8 и 43,3%, соответственно. Через 1 и 2 нед

относительная площадь мантийной зоны в таких фолликулах превосходила контрольный уровень на 70,3 и 63,5%, соответственно. Процент мозговых синусов на срезе лимфатических узлов через 1 нед был больше на 25,3; 26,3; 25,5 и 31,4%, соответственно, чем в контроле и спустя 3, 4 и 5 нед.

Изменения цитограммы коркового плато. Относительное содержание иммуно- и плазмобластов через 1 и 2 нед было больше, чем в контроле, в 2,3 и 2,4 раза, соответственно. Процентное содержание ретикулярных клеток постепенно возрастало и на 4-й неделе было больше на 26,9%, чем через 1 нед, а к 5-й неделе превосходило значения аналогичных показателей на 1-й и 2-й неделях на 30,3 и 29,1 %, соответственно. Численная плотность таких клеточных элементов к 5-й неделе была больше на 48,9 и 45,9%, соответственно, по сравнению с состоянием на 1-й и 2-й неделях.

Относительное количество макрофагов медленно увеличивалось в течение всего времени наблюдения и к 5-й неделе было на 70,5% больше исходного. Процент делящихся клеток в корковом плато был больше контроля через 1 и 2 нед соответственно в 2,5 и 2,4 раза, потом этот показатель постепенно снижался и достоверно не отличался от исходного.

Изменения цитограммы центров размножения. Относительное содержание иммуно- и плазмобластов через 1 нед было больше на 51 и 37,6%, соответственно, чем в контроле и спустя 5 нед. Через 2 нед бластных форм было больше на 66,5; 31,4 и 51,8%, соответственно, относительно контроля и состояния через 4 и 5 нед. К 3-й неделе незрелых клеточных форм было больше на 51,9 и 38,5%, соответственно, по сравнению с контролем и с состоянием на 5-й неделе. Численная плотность иммуно- и плазмобластов через 1 нед была больше на 89,6; 52,4 и 64,1%, соответственно, чем в контроле и спустя 4 и 5 нед. На 2-й неделе количество бластных форм на единицу площади среза было выше на 94,1; 56 и 67,9%, соответственно, и также относительно контроля и состояния на 4-й и 5-й неделях.

Процентное содержание ретикулярных клеток через 1 нед было ниже на 65,3; 29,1 и 51,8%, соответственно, чем в контроле и спустя 4 и 5 нед. На 2-й неделе ретикулярных клеток было меньше на 68,4; 31,5 и 54,6%, соответственно, и также относительно контроля и состояния на 4-й и 5-й неделях. К 3-й неделе клеток стромы было меньше на 41,7%, но только по сравнению с контролем.

Относительное количество макрофагов у интактных животных было меньше на 95,4%, в 2,3, 2,1 раза, на 63,5 и 63,5%, соответственно, чем через 1, 2, 3,4 и 5 нед. Абсолютное число этих клеток спустя 1 нед было выше в 2,4 раза, на 51,2 и 43,1%, соответственно, чем в контроле и спустя 4 и 5 нед. На 2-й неделе макрофагов было больше в 2,7 раза и на 67,9%, также соответственно, относительно контроля и состояния на 4-й неделе. К 3-й неделе таких клеточных форм было больше в 2,3 раза только по сравнению с контролем.

Процент митозов был выше контроля на 1-й и 2-й неделях на 87,3 и 93,6%, соответственно. Число фигур митозов на 105 мкм2 площади среза центра фолликула через 1 нед было выше в 2,3,2,2 и 2,2 раза, соответственно, чем в контроле и спустя 4 и 5 нед. На 2-й неделе делящихся клеток было больше в 2,2, 2,1 и 2,1 раза, также соответственно, относительно контроля и состояния на 4-й и 5-й неделях.

Изменения численности клеток в просвете мозговых синусов.

Численная плотность всех клеток в просвете мозговых синусов лимфатических узлов через 1 и 2 нед после начала эксперимента была больше соответственно в 3,2 и 2,5 раза по сравнению с контролем.

Относительное содержание иммуно- и плазмобластов через 1 нед было выше в 5,8, 7,3 и 6,5 раза, соответственно, чем в контроле и спустя 4 и 5 нед. Численная плотность этих клеток через 1 нед была больше в 14,6,17,5 и 15,6 раза, также соответственно, и также по сравнению с состоянием в контроле и спустя 4 и 5 нед.

Относительное число ретикулярных клеток постепенно возрастало и на 5-й неделе стало больше соответственно на 26,6; 48,8; 51 и 34,2%, чем в контроле и спустя 1,2 и 3 нед. Численная плотность клеточных элементов стромы ко 2-й неделе была выше в 2,7 раза по сравнению с исходным значением.

Через 1 нед относительное количество макрофагов было больше соответственно в 3,9, 2,7,3,2 и 3,9 раза, чем в контроле и на 3-й, 4-й и 5-й неделях. Спустя 2 нед этих клеток стало больше в 2,9, 2, 2,4 и 3 раза, также соответственно, и также относительно контроля и состояния на 3-й, 4-й и 5-й неделях. Величина значения абсолютной численности макрофагов через 1 нед была выше в 12,2, 6,6, 7,5 и 9 раз относительно контроля и значений на 3-й, 4-й и 5-й неделях после начала эксперимента. Спустя 2 нед макрофагов было больше соответственно в 7,2, 3,8,4,4 и 5,3 раза по сравнению с контролем и состоянием спустя 3, 4 и 5 нед.

Процент нейтрофилов через 1 нед был больше в 3,9, 2,6, 3,2 и 3 раза, соответственно, чем в контроле и на 3-й, 4-й и 5-й неделях. Через 2 нед таких лейкоцитов стало больше соответственно в 3, 2,4 и 2,3 раза относительно контроля и состояния на 4-й и 5-й неделях. Численная плотность нейтрофильных лейкоцитов через 1 нед была выше в 12,2, 6,1, 7,2 и 6,7 раза относительно контроля и значений на 3-й, 4-й и 5-й неделях после операции. Спустя 2 нед данных клеточных форм было больше соответственно в 7,3,3,7,4,3 и 4 раза по сравнению с контролем и состоянием спустя 3, 4 и 5 нед.

Регенерация участка повреждения кости нижней челюсти и состояние субмандибулярных лимфатических узлов при использовании аутологичного фибринового сгустка

Регенерация участка повреждения кости нижней челюсти.

Спустя 1 нед после повреждения кости и заполнения дефекта БТФС отверстие было полностью заполнено слившимися островками вновь сформированной кости. Регенерация кости после применения БТФС уже к 1-й неделе завершилась полным замещением искусственного дефекта.

В большинстве случаев через 2 нед отверстие было закрыто вновь образованной костной тканью с большим числом полнокровных кровеносных сосудов на периферии дефекта и хрящевой тканью в центре. Спустя 3,4 и 5 нед после повреждения кости нижней челюсти и применения БТФС дефект был полностью замещен вновь образованной костной тканью с хаотично расположенными костными балками сформированной костной мозоли и полостями с костным мозгом.

Изменения структуры лимфатических узлов. Через 1, 2 и 3 нед объемная плотность коркового плато превосходила исходный уровень на 43,4; 38,2 и 22,1 %, соответственно. Объемная плотность лимфоидных фолликулов без центров размножения на срезе спустя 1 и 2 нед была выше исходного состояния соответственно на 48,4 и 46,6%. Относительная площадь мантийной зоны в фолликулах с центрами размножения через 1 и 2 нед превосходила контрольный уровень соответственно на 56,7 и 58,9%. Процент мозговых синусов на срезе лимфатических узлов только на 1 -й неделе был достоверно больше контроля на 33,6%.

Различия в строении субмандибулярных лимфатических узлов крыс со спонтанным заживлением дефекта нижней челюсти и после

заполнения отверстия БТФС были отмечены в значениях объемной плотности коркового плато. Величина этого показателя на 1 -й, 2-й, 4-й и 5-й неделях после применения БТФС была достоверно меньше соответственно на 27,2; 31,9; 25 и 43,1%, чем при спонтанной регенерации. При этом на 4-й и 5-й неделях спонтанной репарации объем коркового плато еще достоверно отличался от контроля, тогда как после использования фибрина уже нет.

Изменения цитограммы коркового плато. Относительное содержание иммуно- и плазмобластов через 1 и 2 нед было больше в 2,2 раза, чем в контроле. Процент ретикулярных клеток постепенно возрастал и на 4-й и 5-й неделях был больше на 36,9 и 38,1%, соответственно, чем спустя 1 нед. Относительное количество делящихся клеток в корковом плато было больше (в 2,5 раза) контроля только на 1-й неделе.

Различия в цитограмме коркового плато между крысами со спонтанным заживлением участка повреждения кости нижней челюсти и репаративными процессами на фоне использования БТФС были установлены в изменениях численности ретикулярных клеток, макрофагов и фигур митозов. После применения БТФС величины значений указанных показателей этих клеточных элементов изменялись не так выражено или раньше возвращались к контрольному уровню.

Изменения цитограммы центров размножения. Относительное содержание иммуно- и плазмобластов через 1 и 2 нед было достоверно выше на 48,1; 36,2 и 58%, соответственно, чем в контроле и спустя 4 и 5 нед. На 2-й неделе бластных форм было больше на 57,3; 44,6 и 67,9%, соответственно, относительно контроля и состояния на

4-й и 5-й неделях. Абсолютное количество иммуно- и плазмобластов спустя 1 нед было выше на 68,9; 43,4 и 78,1%, соответственно, чем в контроле и спустя 4 и 5 нед. На 2-й неделе незрелых клеток было больше на 85,9; 43,4 и 96,1%, соответственно, относительно контроля и состояния на 4-й и 5-й неделях.

Процент ретикулярных клеток через 1 нед был статистически достоверно ниже на 59,2 и 52,7%, соответственно, чем в контроле и спустя 5 нед. На 2-й неделе клеток стромы было меньше соответственно на 51 и 44,8% относительно контроля и состояния на

5-й неделе.

Относительное содержание макрофагов через 1,2 и 3 нед было больше на 81,7%, в 2,2 и 2,2 раза, соответственно, чем у интактных

животных. Абсолютное число этих клеток в контроле было ниже соответственно в 2,1,2,6 и 2,5 раза, чем спустя 1,2 и 3 нед. Процент митозов был выше контроля на 1-й и 2-й неделе соответственно на 87,3 и 84,3%. Число фигур митозов на 105 мкм2 площади среза центра фолликула через 1 и 2 нед было выше соответственно в 2,1 и 2,2 раза по сравнению с исходными данными.

Отличия в цитограмме герминативных центров лимфоидных фолликулов между животными со спонтанным заживлением участка повреждения кости нижней челюсти и репаративными процессами на фоне использования БТФС были найдены в изменениях митоти-ческой активности, численности иммуно- и плазмобластов, ретикулярных клеток и макрофагов. Величины значений показателей указанных клеточных элементов после применения БТФС изменялись менее выражено и раньше возвращались к исходному уровню.

Изменения численности клеток в просвете мозговых синусов. Численная плотность всех клеток в просвете мозговых синусов лимфатических узлов через 1 нед после начала эксперимента была больше соответственно в 3,7 и 2,8 раза относительно состояния в контроле и на 4-й неделе. Относительное содержание иммуно- и плазмобластов возросло к 1-й неделе в 6,2 раза по сравнением с контролем. Численная плотность иммуно- и плазмобластов спустя 1 нед была больше в 17,8 раза относительно контроля и состояния на 5-й неделе.

Относительное число ретикулярных клеток постепенно возрастало и на 4-й неделе было больше соответственно на 37,8 и 38,5% относительно состояния спустя 1 и 2 нед. Через 5 нед клеток стромы было больше на 47,4% по сравнению с состоянием на 1-й неделе.

Через 1 нед относительное количество макрофагов было больше соответственно в 4,1, 2,5, 3,3 и 3,4 раза, чем в контроле и на 3-й, 4-й и 5-й неделях. Спустя 2 нед этих клеток стало больше соответственно в 2,8,2,1,2,8 и 2,9 раза относительно контроля и состояния на 3-й, 4-й и 5-й неделях. При этом на 3-й неделе макрофагов было больше на 61,1% по сравнению с контролем. Абсолютная численность макрофагов через 1 нед была выше в 15, 6,6, 8,9 и 10,2 раза относительно контроля и значений на 3-й, 4-й и 5-й неделях после начала эксперимента. Спустя 2 нед макрофагов было больше в 9,1 раза только по сравнению с контролем.

Спустя 1 нед процент нейтрофилов был больше соответственно в 3,7, 3, 3,4 и 3,1 раза, чем в контроле и на 3-й, 4-й и 5-й неделях.

Через 2 нед таких лейкоцитов стало больше соответственно в 2,9 и 2,6 раза относительно контроля и состояния на 4-й неделе. Численная плотность нейтрофильных лейкоцитов через 1 нед была выше в 13,6, 8,3, 10,1 и 9,9 раза по сравнению с контролем и состоянием на 3-й, 4-й и 5-й неделях после начала эксперимента. Следует отметить большое число эозинофилов в просвете мозговых синусов отдельных крыс спустя 1 и 2 нед после применения фибрина.

Отличия в цитограмме содержимого мозговых синусов между животными со спонтанным заживлением участка повреждения кости нижней челюсти и репаративными процессами на фоне использования БТФС касались в основном изменений численности всех клеток и, в частности, иммуно- и плазмобластов, ретикулярных клеток, макрофагов, нейтрофилов и митозов. Изменения показателей указанных клеточных элементов после применения БТФС были менее выражены и раньше возвращались на уровень контроля. Процент макрофагов при самостоятельной регенерации был выше контроля в течение 1 - 2 нед, однако, после применения БТФС этот показатель оставался повышенным в течение более длительного срока.

Фибрин в тканях, согласно литературным данным, уменьшает выраженность воспалительного процесса (Romanos G.E., Strub J.R., 1998; Колесников И.С., 2006; Майбородин И.В. и др., 2007, 2008, 2009; Рагимова Т.М., 2009) и ограничивает распространение инфекции (Dohan D.M. et al., 2006; Choukroun J. et al., 2006). Продукты деградации фибрина вызывают миграцию остеогенных клеток и гингивальных фибробластов in vitro и обеспечивают более быструю регенерацию хирургических костных дефектов in vivo в эксперименте. Фибриновые клеи и пленки могут служить своеобразным субстратом для поддержки роста фибробластов и их функций (Fabris G. et al., 1998; Yaman Z., 1998; Ren W.H. et al., 1999, 2000; Soffer E. et al., 2003).

Плазма или фибриновый сгусток содержат множество цитокинов и ростовых факторов в высокой концентрации. Эти вещества вызывают миграцию и деление всех мезенхимальных и эпителиальных клеток, стимулируют синтез коллагена и матрикса соединительной ткани. Фибробласты, располагаясь в фибриновой сети, начинают синтез коллагена не только со дна раны, но и из ее полости, таким образом более быстро на месте формируется рубцовая ткань. Фибрин не только облегчает миграцию фибробластов, но и сам по себе ускоряет синтез соединительной ткани (Anitua Е. et al., 2004, 2005,

2006; Hokugo A. et а!., 2005; Yamazaki S. et al., 2005; Kawase T. et al., 2005; Schmidt M.B. et al., 2006; Schwartz-Arad D. et al., 2007). Введение фибринового сгустка в полость раны, видимо, может защищать окружающие ткани как от распространения микроорганизмов, так и от излишнего воздействия лизосомальных ферментов фагоцитов. Происходит ограничение очага деструкции и в связи с этим раньше начинаются регенераторные процессы, в тканях оказывается меньший объем антигенов и детрита, происходит более быстрое очищение раны.

Начало репарационных процессов в поврежденной кости нижней челюсти при применении БТФС проходит интенсивнее, чем при спонтанном заживлении. Отверстие раньше и интенсивнее заполняется островками костной ткани, видимо, ее формирование начинается сразу после операции без потери времени на лизис и удаление кровяного сгустка с большим числом эритроцитов. Костные островки раньше сливаются и формируют молодую костную ткань.

По лимфатическим сосудам осуществляется транспорт микробных токсинов и метаболитов из воспалительного очага в регионарные и коллекторные лимфатические узлы (Буянов В.М., Алексеев A.A., 1990). Последние представляют собой мощный биологический фильтр, способный задержать продукты распада (Ottaviani G., 1970; Schroer Н., Hauck G., 1977; Сапин М.Р., Борзяк Э.И., 1982; Бородин Ю.И., Григорьев В.Н., 1986).

После индукции воспалительного процесса созданием отверстия в кости нижней челюсти и при естественном течении регенерации и после применения БТФС в субмандибулярных лимфатических узлах расширяется корковое плато. Эти изменения были зарегистрированы уже на 1-й неделе после начала эксперимента, далее состояние лимфоузлов постепенно возвращалось к исходному уровню, но все равно были достоверные отличия от контроля даже на 5-й неделе. Через 1 нед возрастала объемная плотность лимфоидных фолликулов без центров размножения, в фолликулах с центрами расширялась мантийная зона. Данные показатели нормализовались к 3 - 4-й неделям и затем оставались на уровне контроля до конца наблюдения.

Расширение коркового плато можно объяснить пролиферацией B-лимфоцитов под действием антигенов (из собственных поврежденных тканей) из места операции и создания искусственного

костного дефекта. Кроме пролиферации в клетках коркового плато стимулировалась дифференцировка. Активно делящиеся и созревающие лимфоциты формировали лимфоидные фолликулы без герминативных центров. Далее в таких узелках, по мере дифференцировки клеток, образовывались светлые центры. Так как клетки по периферии продолжали делиться, то в данных узелках процент периферии (мантийной зоны) был более высоким относительно самих центров размножения (Бородин Ю.И., Григорьев В.Н., 1986).

В корковом плато лимфатических узлов крыс с естественно протекающими репаративными процессами через 1 -2 нед возросло число иммуно- и плазмобластов и делящихся клеток. Затем численность указанных клеток нормализовалась, но к концу наблюдения увеличилось содержание ретикулярных клеток и макрофагов. При массивном поступлении клеточного и тканевого детрита, часть его может оседать в просвете промежуточных синусов, проходящих в корковом веществе. Такие крупные фрагменты детрита или постепенно лизируются фагоцитами или сначала инкапсулируются, а потом полностью замещаются соединительной тканью.

Развитие склероза в различных структурах лимфатических узлов, согласно литературным данным, начинается именно с «огрубления» их ретикулярной стромы (Kinmonth J.B., Wolfe J.H., 1980; Fyfe N.C. et al., 1982; Rada I.O. et al., 1983; Tudose N., Rada О., 1984; Browse N.L., 1986; Бородин Ю.И. и др., 2000). Увеличение численности в корковом плато ретикулярных клеток и макрофагов, которые являются неотъемлемым компонентом соединительной ткани, к концу наблюдения, скорее всего, связано с постепенной склеротической трансформацией этой зоны.

В герминативных центрах лимфоидных фолликулов через 1 - 2 нед возрастало число иммуно- и плазмобластов, макрофагов, повышалась митотическая активность. Активация антигенами В-лимфоцитов коркового плато стимулирует их пролиферацию и дифференцировку, далее клетки формируют лимфоидные фолликулы, где процессы размножения и созревания клеток продолжаются. За счет этого в таких структурах возрастает число иммунно- и плазмобластов и фигур митозов. Кратковременный подъем числа макрофагов, видимо, обусловлен необходимостью лизиса детрита, поступающего из места хирургического вмешательства.

В системе мозговых синусов субмандибулярных лимфатических узлов животных без лечения БТФС на 1 - 2-й неделях увеличивалась

численная плотность всех клеток, количество иммуно- и плазмоб-ластов, макрофагов и нейтрофилов. Затем численность указанных клеток нормализовалась, но к концу наблюдения возрастало содержание ретикулярных клеток.

Синусная система лимфатических узлов представлена ретику-лярно-клеточным каркасом, в сети которого расположено множество макрофагов и плазматических клеток (Жданов Д.А., 1952; Foldi М., 1969;OttavianiG., 1970;CasJey-Smith J.R., 1973; Зербино Д.Д., 1974; Бородин Ю.И., Григорьев В.Н., 1986; Бородин Ю.И. и др., 1990). Клетки, присутствующие в просвете синусов, попали туда, главным образом, из региона лимфосбора. По-видимому, численность иммуно- и плазмобластов (в первые сроки после начала эксперимента) и плазмоцитов (к концу наблюдения) увеличивалась в связи с миграцией туда незрелых и зрелых клеток B-линии. Количество макрофагов и нейтрофилов увеличивалось из-за поступления их из региона лимфосбора. Когда острота воспаления стихала по мере регенерации костного дефекта, в мозговых синусах нормализовалась численность этих клеток.

Возрастание содержания ретикулярных клеток, видимо, обусловлено началом склеротических процессов по ходу мозговых синусов (ограничение и замещение соединительной тканью фрагментов тканевого и клеточного детрита). Такой склероз в лимфатических узлах в результате развития воспалительного процесса хорошо известен и описан в научной литературе (Kinmonth J.B., Wolfe J.H, 1980; FyfeN.C. et al., 1982; Rada I.O. et al, 1983; TudoseN, Rada О, 1984; Browse N.L., 1986; Бородин Ю.И. и др., 2000). Практически такие же однонаправленные изменения той или иной степени выраженности произошли и в субмандибулярных лимфатических узлах после применения БТФС для лечения повреждения кости нижней челюсти.

Различия в строении субмандибулярных лимфатических узлов крыс со спонтанным заживлением дефекта нижней челюсти и после заполнения отверстия БТФС заключались в разных значениях объемной плотности коркового плато, которая после применения фибрина была меньше, чем при спонтанной регенерации. При этом на 4-й и 5-й неделях спонтанной репарации объем коркового плато еще достоверно отличался от контроля, а после использования фибрина уже нет.

Видимо, более быстрая регенерация тканей после применения БТФС (Schmidt M.B. et al, 2006; Ito К. et al, 2006; Schwartz-Arad D.

et al., 2007; You T.M. et al., 2007; Lee H.J. et al., 2007; Шегшев Б.В. и др., 2009; Рагимова Т.М., 2009), которая проявлялась также в более интенсивном заживлении дефекта кости нижней челюсти, приводила к меньшему объему детрита и антигенных веществ, поступавших в субмандибулярные лимфатические узлы. Вследствие этого, реакция незрелых иммунокомпентентных клеток коркового плато была выражена в меньшей степени и, соответственно, меньше выражена гипертрофия данной зоны.

Различия в цитограмме коркового плато и лимфоидных узелков со светлыми центрами между крысами со спонтанным заживлением участка повреждения кости нижней челюсти и репаративными процессами на фоне использования БТФС заключались в разных изменениях численности иммуно- и плазмобластов, ретикулярных клеток, макрофагов и фигур митозов. После применения БТФС показатели указанных клеточных элементов изменялись не так выражено и раньше возвращались к контрольному уровню.

Такие отличия изменений клеточного состава паренхимы В-зависимых структур лимфатических узлов, скорее всего, также обусловлены ускорением процессов репарации костной ткани после использования БТФС. Вследствие менее значительной антигенной стимуляции были также в меньшей степени выражены процессы активации пролиферации и дифференцировки иммунокомпетентных клеток, что проявлялось в снижении степени изменений или более ранней нормализации показателей численности, прежде всего, непосредственно фигур митозов, а также иммуно- и плазмобластов, то есть пролиферирующих и созревающих клеточных элементов.

Меньшая степень поступления антигенов в лимфатические узлы способствует снижению миграции макрофагов в данные органы или уменьшению процессов дифференцировки их на месте из моноцитов. Видимо, со снижением антигенной и токсической нагрузки на лимфатические узлы связана меньшая степень увеличения численности ретикулярных клеток. В данном случае можно сделать заключение о меньшей вероятности развития склеротических процессов в данных органах.

В цитограмме содержимого просвета мозговых синусов после применения БТФС изменения показателей макрофагов были более выраженными, чем при естественном течении процессов регенерации. Возможно, что элиминация компонентов БТФС из тканей происходит посредством лизиса фагоцитами, в частности, макрофагами

(Колесников И.С., 2006; Майбородин И.В. и др., 2007, 2008,2009). Вследствие этого возрастает численность данных клеточных элементов в синусной системе регионарных лимфатических узлов.

Следует обратить внимание на то, что при использовании БТФС в цитограмме мозговых синусов некоторых животных возрастает содержание эозинофилов. В литературе описаны аллергические реакции, развивающиеся на введение фибрина в стоматологической практике (Ockenfels Н.М. et al., 1995), и эозинофилия в тканях десны отдельных пациентов после стоматологических операций с применением фибриновых технологий (Колесников И.С., 2006; Майбородин И.В. и др., 2007, 2008, 2009; Шеплев Б.В. и др., 2009; Рагимова Т.М., 2009). Эозинофилия также может быть признаком аллергизации организма. Поэтому в клинической практике следует применять препараты фибрина под прикрытием десенсибилизирующих лекарственных средств.

1. После повреждения кости нижней челюсти у крыс и естественном ходе регенерации происходит заполнение дефекта кровью, формирование сгустка с большим числом эритроцитов. Через 1 нед в дефекте кости среди фрагментов кровяного сгустка и грануляций формируются отдельные островки молодой костной ткани, через 2 нед дефект в кости нижней челюсти полностью замещается молодой костной тканью.

2. После операции с последующим заполнением дефекта кости нижней челюсти БТФС не происходит образования кровяного сгустка. Через 1 нед весь дефект костной ткани заполняется слившимися островками вновь сформированной кости, через 2 нед после использования БТФС происходит дальнейшее замещение дефекта костной тканью и формирование костной мозоли.

3. В субмандибулярных лимфатических узлах при заживлении участка повреждения нижней челюсти расширяется корковое плато, увеличивается относительный объем лимфоидных фолликулов и мозговых синусов. Во всех структурных отделах лимфатических узлов сначала возрастает число иммуно- и плазмобластов, делящихся клеток и клеточных элементов с признаками деструктивных изменений, к концу наблюдения увеличивается содержание ретикулярных клеток и макрофагов.

4. Различия в строении субмандибулярных лимфатических узлов крыс при естественным ходе регенерации дефекта нижней челюсти и после заполнения отверстия БТФС заключаются в разных значениях объемной плотности коркового плато и паракортекса. При спонтанном заживлении размеры этих структур через 4 и 5 нед после операции достоверно отличаются от исходных, после применения БТФС - находятся на уровне контроля.

5. На фоне использования БТФС показатели численности лимфоцитов, иммуно- и плазмобластов, ретикулярных клеток, макрофагов, митотически активных клеток и клеток с признаками деструктивных изменений в различных зонах лимфоидной паренхимы изменяются в меньшей степени и раньше возвращаются к контрольному уровню, чем при естественном заживлении.

6. Использование фибрина обусловливает более значительное увеличение численности макрофагов и эозинофилов в просвете мозговых синусов лимфатических узлов, что связано с необходимостью лизиса БТФС макрофагами в участке повреждения кости нижней челюсти и последующей миграцией этих клеток с фибрином в регионарные лимфатические узлы.

1. В связи с тем, что после использования БТФС в меньшей степени выражены признаки воспалительного процесса в участке повреждения кости, о чем свидетельствуют более интенсивная регенерация дефекта и менее значительные изменения регионарных лимфатических узлов, целесообразно применение препаратов фибрина, приготовленных из аутологичной крови, для ускорения репаративных процессов костных тканей в стоматологии, хирургии и травматологии.

2. С целью предупреждения возможности развития аллергических реакций в ответ на присутствие БТФС в тканях необходимо дальнейшее совершенствование данного метода: максимальное ограничение времени контакта БТФС с инородными веществами во время его подготовки, разработка способов контроля степени контрактации БТФС, определение степени его минимально необходимого объема и линейных размеров для эффективного применения, а также использование десенсибилизирующих лекарственных средств.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Майбородин И.В., Колесников И.С., Шеплев Б.В., Рагимова Т.М., Шевела А.И., Ковынцев Д.Н. и др. Гранулематозное воспаление после применения препаратов фибрина // Морфологические ведомости. - 2007. - № 3-4. - С. 116 -118.

2. Майбородин И.В., Шевела А.И., Колесников И.С., Шеплев Б.В., Рагимова Т.М., Ковынцев А.Н., Ковынцев Д.Н. Гранулематозное воспаление после применения фибрина для дентальной имплантации // Вестн. Новосибирского гос. ун-та: Сер. биол., клин, мед. - 2008. - Т. 6, № 2. - С. 85 - 89.

3. Майбородин И.В., Колесников И.С., Шеплев Б.В., Рагимова Т.М., Ковынцев Д.Н. и др. Морфология десны после реконструктивных операций с применением препаратов фибрина // Морфология.

- 2008. - Т. 133,- № 3. - С. 68.

4. Майбородин И.В., Колмакова И.А., Притчина И.А., Козлова Е.В., Войтович А.Б., Ковынцев А.Н., Колесников И.С., Шеплев Б.В., Рагимова Т.М., Ковынцев Д.Н. Возрастные изменения эпителия десны здоровых людей и пациентов с деструктивным хроническим периодонтитом // Морфология. - 2008. - Т. 133, № 3. - С. 68 - 69.

5. Майбородин И.В., Шевела А.И., Колесников И.С., Шеплев Б.В., Рагимова Т.М., Ковынцев Д.Н., Ковынцев А.Н. Особенности лимфотока и гемомикроциркуляции в десне при лечении острого гнойного периостита челюсти с применением фибринового сгустка // Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии: Материалы международ, конф.. Новосибирск, 2008. - Т. 2. - С. 5 -7.

6. Майбородин И.В., Козлова Е.В., Притчина И.А., Колмакова И.А., Войтович А.Б., Ковынцев А.Н., Ковынцев Д.Н. Особенности лимфотока в десне при течении периодонтита на фоне артериальной гипертензии // Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии: Материалы международ, конф. - Новосибирск, 2008.

- Т. 2. - С. 7 - 9.

7. Майбородин И.В., Колесников И.С., Шеплев Б.В., Ковынцев Д.Н., Ковынцев А.Н. Структурная организация тканей десны после дентальной имплантации с использованием фибринового сгустка // Вопросы морфологии XXI века: Сб. науч. тр., посвящ. 100-летию каф. мед. биол. СПбГМА им. И.И.Мечникова. -СПб.: СПбГМА им.

И.И.Мечникова: Изд-во ДЕАН, 2008. - Вып. 1. - С. 181 - 182.

8. Майбородин И.В., Колмакова И.А., Притчина И.А., Козлова Е.В., Ковынцев А.Н., Ковынцев Д.Н. Возрастная морфология десны в норме и при деструктивном хроническом периодонтите // Вопросы морфологии XXI века: Сб. науч. тр., посвящ. 100-летию каф. мед. биол. СПбГМА им. И.И.Мечникова. - СПб.: СПбГМА им. И.И.Мечникова: Изд-во ДЕАН, 2008. - Вып. 1. - С. 182.

9. Майбородин И.В., Колмакова И.А., Притчина И.А., Козлова Е.В., Ковынцев А.Н., Колесников И.С., Шеплев Б.В., Ковынцев Д.Н. Реакция десны при сочетании периодонтита с артериальной гипертензией // Челюстно-лицевая хирургия и стоматология: Новые технологии в стоматологии: Мат. II съезда гигиенистов стоматологических России, III Сибирского конгр. и Всеросс. симп. - Новосибирск, 2008. - С. 104-109.

10. Майбородин И.В., Колесников И.С., Шеплев Б.В., Ковынцев Д.Н. и др. Ускорение репарации тканей при дентальной имплантации с применением фибрина// Челюстно-лицевая хирургия и стоматология: Новые технологии в стоматологии: Мат. II съезда гигиенистов стоматологических России, III Сибирского конгр. и Всеросс. симп. -Новосибирск, 2008.-С. 109-112.

11. Майбородин И.В., Колесников И.С., Шеплев Б.В., Рагимова Т.М., Ковынцев А.Н., Ковынцев Д.Н., Шевела А.И. Морфология подлежащих тканей десны после дентальной имплантации с применением препаратов фибрина // Стоматология. - 2009. - Т. 88, № 1. - С. 9 - 13.

12. Майбородин И.В., Войтович А.Б., Козлова Е.В., Колмакова И.А., Притчина И.А., Ковынцев Д.Н. и др. Формирование плазмоцитарных инфильтратов в десне пациентов с хроническим верхушечным периодонтитом // Морфология. - 2009. - Т. 135, № 2.-С. 43 - 47.

13. Майбородин И.В., ГавриловаВ.В., Колмакова И.А., Притчина И.А., Ковынцев Д.Н. и др. Возрастно-половые особенности тканей десны в норме и при хроническом верхушечном периодонтите // Стоматология. - 2009. - Т. 88, № 2. - С. 29 - 33.

14. Майбородин И.В., Козлова Е.В., Колмакова И.А., Ковынцев Д.Н. и др. Лимфоидные фолликулы слизистой оболочки десны при хроническом воспалении // Морфология, лимфология, клиника: Сб. науч. работ, посвященных 80-летию акад. Ю.И.Бородина. - Новосибирск: Сибмедиздат НГМУ, 2009. - С. 192 - 198.

15. Майбородин И.В., Колесников И.С., Шеплев Б.В., Ковынцев Д.Н. и др. Гранулематозное воспаление, как реакция на фибрин в тканях // Морфология, лимфология, клиника: Сб. науч. работ, пос-вящ. 80-летию акад. Ю.И.Бородина. - Новосибирск: Сибмедиздат НГМУ, 2009. - С. 207-211.

16. Майбородин И.В., Козлова Е.В., Колмакова И.А., Ковынцев Д.Н. и др. Особенности плазмоцитарной инфильтрации слизистой оболочки десны при хроническом верхушечном периодонтите // Хирургия, морфология, лимфология. - 2009. - Т. 6, № 11. - С. 96 -101.

17. Майбородин И.В., Колесников И.С., Шеплев Б.В., Шевела А.И., Ковынцев А.Н., Колмакова И.А., Ковынцев Д.Н. Применение препаратов фибрина в стоматологии и развитие гранулематозного воспаления на аутофибрин // Хирургия, морфология, лимфология. - 2009. - Т. 6, № 11. -С. 101-105.

Соискатель

Д.Н.Ковынцев

Подписано в печать 16.04.2010. Формагг 60x84/16. Гарнитура Тайме. Бумага Zoom plus. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 42. Отпечатано в типографии ОАО "НИИ систем" Новосибирск-58, ул. Русская, 39. т. 333-37-39

2009197405

Оглавление диссертации Ковынцев, Дмитрий Николаевич :: 2010 :: Новосибирск

Оглавление.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Применение фибрина и его препаратов в стоматологии.

1.2. Строение и основные функции лимфатических узлов.

1.3. Состояние лимфатической системы при воспалительных процессах.

Глава 2. Материал и методы исследования.

2.1. Группы животных и сроки забора материала.

2.2. Моделирование дефекта нижней челюсти и приготовление БТФС.

2.3. Объект исследования, подготовка материала к изучению методами световой микроскопии, морфологические методы исследования, морфометрия и статистическая обработка полученных данных.

Глава 3. Участок повреждения кости нижней челюсти и субмандибулярные лимфатические узлы при спонтанной регенерации.

3.1. Регенерация участка повреждения кости нижней челюсти.

3.2. Состояние субмандибулярных лимфатических узлов.

3.2.1. Изменения структуры лимфатических узлов.

3.2.2. Изменения цитограммы коркового плато.

3.2.3. Изменения цитограммы центров размножения.

3.2.4. Изменения численности клеток в просвете мозговых синусов.

Глава 4. Регенерация участка повреждения кости нижней челюсти и состояние субмандибулярных лимфатических узлов при использовании аутологичного фибринового сгустка.

4.1. Регенерация участка повреждения кости нижней челюсти.

4.2. Состояние субмандибулярных лимфатических узлов.

4.2.1. Изменения структуры лимфатических узлов.

4.2.2. Изменения цитограммы коркового плато.

4.2.3. Изменения цитограммы центров размножения.

4.2.4. Изменения численности клеток в просвете мозговых синусов.

Введение диссертации по теме "Патологическая анатомия", Ковынцев, Дмитрий Николаевич, автореферат

Актуальность темы:

Заживление ран - это ответ на повреждение и процессы восстановления целости тканей, которые включают в себя хемотаксис, продукцию матриксных протеинов, репликацию клеток, неоваскуляризацию и ремоделирование тканей. Повреждение тканей приводит к разрыву кровеносных сосудов, что, в свою очередь, является первой ступенью активации тромбоцитов после контакта с коллагеном. Тромбоциты инициируют образование тромба через активацию коагу-ляционной системы, после образования тромбина фибриноген трансформируется в фибрин и это - первый шаг заживления раны. Препараты фибрина воспроизводят данный процесс и облегчают процессы репарации. Перспективно использование препаратов фибрина с добавлением определенного количества необходимых цитокинов, релизов и ростовых факторов (Jackson M.R., 2001; Mankad P.S., CodispotiM., 2001; Valbonesi M., 2006; Laidmae I. et al.5 2006).

В течение репарации раны фибрин действует как барьер, предотвращающий кровопотерю, и как матрица для миграции и роста эндотелиальных и других клеток (Kaijzel E.L. et al., 2006). Траектории миграции фибробластов к региону раны зависят от уровня фибрина и концентрации хемоаттрактантов, продуцируемых лейкоцитами (McDougall S. et al., 2006).

Продукты деградации фибрина вызывают миграцию остеогенных клеток и гингивальных фибробластов (первых быстрее) in vitro и более быструю регенерацию хирургических костных дефектов in vivo в эксперименте. Фибриновые клеи и пленки могут служить своеобразным субстратом для поддержки роста фибробластов и их функций. Таким образом, адгезивные материалы, содержащие фибрин и фибронектин, их мономеры или продукты деградации, ускоряют заживление периодонтальных, в том числе и костных, тканей (Blob U., Linden С., 1982; NakayaH., Kamoi К., 1989; Ohazama A. etal., 1996; Costa-Noble daR. et al., 1996; Ozcan G. et al., 1997; Lorimier S. et al., 1997, 1998; Sullivan S.M. et al., 1997; C